Hieff Trans™ Booster DNA/RNA 轉染試劑
Hieff Trans™ Booster DNA/RNA 轉染試劑（貨號 40801ES）是 Yeasen 研發的次世代高分子聚合物轉染試劑，可作為 Lipofectamine 3000 (Lipo3000) 的高效替代方案。該產品透過 AI 與高通量篩選平台開發，能大幅降低細胞毒性，並在流式細胞儀測試中達到 >90% 的轉染效率。它適用於 DNA、siRNA、miRNA、mRNA 及 ASO 等多種核酸，甚至能輸送高達 15 kb 的大片段。
Hieff Trans™ Booster DNA/RNA Transfection Reagent
這款試劑透過以下四個關鍵步驟，克服了傳統脂質體轉染的瓶頸：
- 高載量能力：結合電荷相互作用與聚合物鏈纏結，載量高於傳統方法。
- 高效細胞攝取：透過膜移位（Membrane translocation）機制，進入細胞速度更快。
- 無損核酸釋放：利用細胞內酶與還原性 GSH 快速降解聚合物，達到零損傷釋放。
- 安全性大幅提升：聚合物具備可快速降解特性，細胞毒性顯著低於傳統脂質體。
產品主要優勢
- 超低細胞毒性：取代傳統脂質體，顯著提高轉染後的細胞存活率。
- 適用難轉染細胞：在原代神經元、T 細胞、懸浮細胞（如 Jurkat、THP-1）中表現優異。
- 廣泛細胞株覆蓋：已在超過 200 種細胞系中驗證（包含 293T, HeLa, HepG2, A549 等）。
- 一劑支援全核酸：單一試劑即可同時處理 DNA、RNA 轉染或共轉染。
適用細胞與細胞株
這款轉染試劑已在 200 多種細胞株與原代細胞中驗證過高效的轉染表現，網頁中特別點名且列出具體協議的常見細胞如下：
- 原代細胞 (Primary Cells)：原代小鼠/人類皮膚成纖維細胞 (MSFs/HSFs)、原代小鼠肝細胞 (PMHs)、原代小鼠神經幹細胞 (mNSCs)、原代骨髓衍生巨噬細胞 (BMDMs)、原代豬肺泡巨噬細胞 (PAMs)、人類臍帶靜脈內皮細胞 (HUVEC) 等。
- 難轉染與懸浮細胞：人類 T 淋巴細胞白血病細胞 (Jurkat)、人類單核細胞白血病細胞 (THP-1)、原代神經元與 T 細胞。
- 常用腫瘤與工具細胞株：293T / HEK293（人類胚胎腎細胞）、HeLa（子宮頸癌細胞）、HepG2（肝癌細胞）、A549（非小細胞肺癌細胞）、MCF-7（乳腺癌細胞）、HCT-116（結直腸癌細胞）、NIH-3T3（小鼠胚胎成纖維細胞）、CHO-S（中國倉鼠卵巢細胞）、Sf9（昆蟲卵巢細胞）。
如何使用（操作指南）
雖然詳細的步驟需參考隨附的說明書（Manual），但根據網頁公開的官方實驗案例，可以歸納出核心的標準操作邏輯與黃金配比：
1. 核心配比參考（以 6 孔盤轉染 DNA 為例）
當您使用 6 孔盤進行質體 DNA 轉染時，官方推薦的標準用量比例為：
- 核酸用量：2.5 μg 質體 DNA。
- 試劑用量：5 μg (μL) 的 Booster 轉染試劑。
- (註：若為 96 孔盤轉染 mRNA，官方範例則為 20 ng mRNA 配對 0.1 μL 轉染試劑)。
2. 基本操作步驟（常規四步法）
- 細胞準備：轉染前一天進行細胞接種，轉染時細胞密度建議維持在 60–80% 匯合度（Confluency）。
- 複合物製備：
- 將核酸（DNA/RNA）稀釋於無血清培養基（如 Opti-MEM）中。
- 將 Hieff Trans™ Booster 轉染試劑與轉染增強劑（Transfection Enhancer）依說明書比例加入。
- 將兩者混合，在室溫下靜置一段時間，讓高分子聚合物完整包裹核酸，形成轉染複合物。
- 加入細胞：將形成的複合物均勻滴加到含有完全培養基的細胞孔盤中。由於該試劑具備低毒性與良好的血清相容性，通常不需要刻意更換為無血清培養基。
- 孵育與偵測：
- 放入培養箱中培養。如果細胞非常敏感，可在 4–6 小時後更換新鮮的完全培養基以將毒性降到最低。
- 偵測時間點：若轉染 mRNA/siRNA，最快數小時至 24–48 小時即可偵測基因表現或 Knock-down 效果；若為 DNA，通常在 48–72 小時進行收樣分析。
3. 官方原廠專家建議（FAQ 技巧）
- 進行共轉染（Co-transfection）時：總 DNA 量不要超過套組上限，且每種質體比例需 ≧10)。若其中一個是報告基因（Reporter plasmid），建議將其比例稀釋至 1:5 或 1:10，避免發生細胞內的「轉錄壓制（Squelching）」現象。
- 原代細胞優化技巧：原代細胞對毒性極為敏感，建議使用較低的試劑劑量、縮短複合物與細胞的接觸時間（4–6 小時即換液），並調整細胞密度至最佳狀態。